PCR实验室核酸检测流程及设备应用

01、核酸采样流程及常用仪器耗材：

     1.采样前准备
一次性帽子、N95及以上防护口罩、防护服、防水靴套、乳胶手套、护目镜或面罩、手消毒液、手电筒、病毒采样管（含拭子、标本袋）、压舌板。
根据个人暴露风险穿戴。

2.采样过程
核对被检测人信息，保存管粘贴检测人信息条码  1，首选鼻咽拭子检测2，次选口咽拭子检测

3.采样结束
折断拭子放入病毒保存管内部，放入标本袋中，放入生物安全运输箱内标本桶里。
批量筛查时， 病毒采样管可选择1拖5,1拖10。根据实际选择生物安全运输箱规格（常规1个标本桶可放置20个采样管标本），采样环境可推荐自产 核酸采样亭，给医护人员提供良好的工作环境

02、 PCR实验室及设备布局

PCR实验室又称临床基因扩增实验室，其特点是能将微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物学研究和实验的常规方法，广泛应用于生物学各个领域，如检验艾滋病、乙肝、禽疫病，癌基因的检测和诊断，DNA指纹、个体识别、亲子鉴别及法医物证，动植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等。
PCR实验室常规分为四个区
1，试剂准备区 
2，标本制备区
3，核酸扩增区
4，产物分析区
各试验区必须遵循单一方向进行，试剂及样品传递应通过传递窗传递。
PCR实验室布局图

03、PCR实验流程及仪器耗材

一.PCR扩增液配制（试剂准备区）:
1.将PCR反应液，阴性质控品，阳性质控品，从-20℃冰箱中取出解冻后，用旋涡混匀仪混匀后，再用离心机瞬时离心。

2.将PCR反应液依据试剂说明书按照相应比例在超净工作台内配制到离心管中，用旋涡混匀仪混匀，再用离心机瞬时离心30秒。

3.在超净工作台中用移液器将PCR扩增液分装在八连管中，用离心机瞬时离心30秒后，通过传递窗转移至标本制备间。

二.核酸提取（磁珠法）：
1.从生物安全运输箱中取出样本，检查确认无泄漏后，放入水浴锅或病毒灭火箱中56℃，30分钟灭活后移至生物安全柜中开盖。

2.在生物安全柜中用移液器将样本分别加入到96深孔板中。

3.将96深孔板放入核酸提取仪中进行核酸提取。

4.在生物安全柜中将阴性质控品，阳性质控品，纯化的核酸用移液器分别加入对应PCR反应管中，盖紧管盖，混匀仪混匀后，放于离心机中离心10秒，转移至PCR扩增区。

三.PCR扩增分析：将八连管放入离心机瞬时离心后，分别放入荧光定量PCR仪中，进行扩增分析。

注意：
1.PCR反应液，阴性质控品，阳性质控品反复冷冻不要超过5次。
2.纯化的核酸可保存在2-8℃冷藏箱中24小时，可在-80℃低温冰箱中长期保存（建议不超过一周）。
3.废弃耗材试剂要在高压蒸汽灭菌器中灭菌后，方可拿出实验室进一步处理。
4.流程为单向进行，禁止双向传递。
5.PCR扩增液配置与核酸提取可同时进行。
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